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白芨有效成分的提取分离技术应用

来源:http://www.zjmmzsw.com/news/40.html 发表时间:2018-03-20

白芨有效成分的提取分离技术应用

白及为兰科植物白及Bletilla striata (Thunb.) Reiehb.f. 的干燥块茎,又名连及草、白芨等。其味苦、甘、涩,微寒;归肺、肝、胃经。功能收敛止血,消肿生肌,主治咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂。现代药理研究表明,白及具有止血、抗溃疡、预防肠粘连、抗菌、抗肿瘤、促进伤口愈合等功效。此外,白及多糖类成分具有抗菌、抗失血性休克、保护皮肤、延缓衰老等功效,同时也是目前药用辅料的研究热点。

1、白芨化学成分研究
白芨化学成分研究从目前的文献报道情况看,日本的YAMAKI先对中药白芨开展系统的化学成分研究,得到了大量菲类衍生物。白芨的主要化学成分是多糖、联苄类和菲类及其衍生物,如丁香树脂酚β-谷甾醇,没食子酸等。
1.1 多糖类:白芨多糖,是一种高分子黏性多糖,化学成分是葡萄甘露聚糖是由β-葡萄糖和β-甘露糖组成。
1.2 联苄类:联苄类化合物是具有1-2二苯乙烷母核或其聚合物的天然产物总称通常是植物中菲类化合物的合成前体,从白芨块茎中分离得到的联苄类化合物是其主要活性成分之一。
1.3 二氢菲类:二氢菲类化合物是目前报道从白芨块茎中分离得到的多的成分。该类化合物芳环上的取代基主要有羟基甲氧基和对羟苄基。
1.4 联菲类,菲类衍生物双菲氧醚衍生物等
1.5 其他成分:除上述几大类化合物外还从白芨块茎中分离得到了甾类萜类酯类和醚类等化合物。

2、白芨的药理作用
2.1 止血
白芨根块水浸出液对实质性器官(肝、脾)肌肉血管出血等外用止血效果很好。
2.2保护胃黏膜
白芨多糖具有明显的抗应激性胃溃疡作用,该作用与白芨多糖增强胃黏膜屏障和防御功能、减少攻击因子对胃黏膜损伤以及增强自由基清除能力等因素有关。
2.3抗菌、抗真菌
白芨乙醇浸提液用平板稀释法,1:100对黄色葡萄球菌、1:20对枯草杆菌及人型结构杆菌有抑制作用,1:4对奥杜盎小孢子菌有抑制作用。
2.4、和抗肿瘤
根据一些研究结果表明,100%白芨水浸出液可促进小鼠骨髓细胞增殖以及白细胞介素-2(IL -2)的分泌,这将会为白芨用于临床治疗肿瘤疾病提供新的理论依据。
2.5促进伤口愈合作用
施伟民等采用无血清表皮器官培养法,发现白芨有明显的促进角质形成细胞游走的作用。高浓度的白芨煎剂上清液能对角质形成细胞一些功能如游走有较好的促进作用,在对创伤愈合和创面覆盖中起着关键的作用。白芨具有这种功能主要是和它所含胶状成分有关,将白芨胶作为外源性重组人表皮生长因子载体,能显著促进创面表面细胞DNA的合成,提高细胞的增殖能力,缩短伤口愈合时间,加速伤口愈合。
2.6其他
白芨可作为代血浆。

3、白芨多糖的提取分离与检测
白芨的活性成分主要是多糖。白及多糖目前在众多领域有着广泛的应用,且在医学研究和临床应用中有着良好的发展前景。研究认为多糖的药理活性与其分子量和化学结构有密切关系。但目前关于不同分子量段白芨多糖药理活性的研究报道极少。崔向磊研究不同分子量白芨多糖抗溃疡性结肠炎活性,结果显示低分子量多糖具有较高活性。已报道白芨多糖在抗炎、促凝血、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等多个方面均显示出良好的药理活性,但上述活性与其分子量之间的关系仍需深入研究,这就需要制备分子量分布窄的高纯度白芨多糖。
鉴于多糖的分子量和分子量分布对其药理活性的显著影响,研究和应用过程中首先要对多糖按照分子量进行分段收集,选择适当的分离纯化方法至关重要。
3.1 水提醇沉法提取分级与白芨多糖的测定
取白芨饮片20g 粉碎过10目筛,60℃干燥后,加8倍量蒸馏水浸泡过夜,继续加蒸馏水于70 ℃水浴搅拌提取3次合并滤液,70℃下减压浓缩至黏稠,加3倍醇使乙醇体积浓度(v/v)达80%,4℃下静置24h,离心分离,弃去上清液,所得沉淀减压干燥,得粗白芨多糖。
精密称取适量白芨多糖配制成20mg·ml-1的溶液,分次加入乙醇使醇体积浓度分别达到30%、40%、50%、70%,边加边搅,每次所得醇沉液于4℃冰箱中放置4h,3000r·min-1离心分离,收集沉淀于60℃减压干燥后得各级多糖,称重并计算其收率。
以葡萄糖为标准,采用苯酚-硫酸法在490nm处测定总糖含量;将各待测组份配成质量浓度2mg·mL-1左右的溶液,采用紫外-可见分光光度计在200~400 nm 处进行光谱扫描分析。取各待测组份1mg,与KBr 研磨后制成透明压片,采用傅里叶变换红外光谱仪在400~4000cm-1处进行红外光谱扫描分析。
3.2 纤维素酶解法 
精密称取纤维素酶300mg,溶于少量水中,40 ℃活化40 min,取白芨粉末20g,加1倍水浸泡30min,将浸泡好的白芨及活化好的酶同时倒入150ml磷酸盐缓冲液(pH5)中,50℃酶解1.5h。加20倍量体积水,在80℃下浸提4h,重复提取3次,合并提取液,滤过,滤液于旋转蒸发仪中减压浓缩至稠膏状,加3 倍量体积95%乙醇沉淀,抽滤,55℃真空干燥,即得多糖粗品。
3.3碱水提取法
用氢氧化钠试液将水调至pH10,称取白芨中等粉20g,加20倍量体积碱水,在80℃下浸提4h,重复提取3 次,以下步骤同3.2项( 自合并提取液)。
3.4超声提取法
称取白芨中等粉20g,加20倍量体积水,在80℃下超声提取30 min,重复提取3 次,以下步骤同3.2项( 自合并提取液)。

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